LIPASE

LIPASE E TRIPSINA

lipase e uma enzima Altamente Que Específica

catalisa uma hidrólise dos ésteres de glic erol de

acidos graxos de Cadeia Longa em (triglicerídios)

Presença de sais biliares e chamado cofator hum

colipase. Como ligações éster, nsa Atomos de Carbono

1 e 3 rompidas São preferentemente, Produzindo

Dois mol de acidos graxos de Cadeia Longa e hum

mol de 2-acilmonoglicerídio Por mol de

hidrolizado triglicerídio. Leco uma lipase um

colipase São sintetizadas Pelas Células acinares do

pâncreas. A also lipase e encontrada mu nd -

cosa intestinal, leucócitos, Células do Tecido adiposo,

Língua e leite.

HIPERLIPASEMIA

A Medida da Atividade da lipase sem soro, plasma,

pleural e ascítico LÍQUIDO, e exclusivamente USADA

par o Diagnóstico de Desordens pancreáticas,

geralmente, pancreatite Aguda. Os níveis de lipase

São Normais nsa CASOS de envolvimento de gla ndulas

salivares.

Pancreatite Aguda.

     A Atividade da lipase aumenta

Entre 4 a 8 Horas, o epidêmico Início do Quadro

atingindo o pico in Máximo 24 Horas. Os Valores

Entre voltametricamente AO normal 8 e 14 Dias. Os aumentos

da lipase geralmente São Paralelo s àqueles da

amilase, EntreTanto, podem ocorrer os tais aumentos

pingos OU epidêmico como elevações da amilase. Na pancreatite

Aguda Pôde-se encontrar normoamilasemia

Pacientes in 20% dos (CASOS EM de hiperlipemia)

Mas com hiperlipasemia. A Atividade lipásica nao

e necessariamente proporcional à severidade do

Ataque.

Complicações da pancreatite Aguda.

A pancreatite

Aguda PoDE Produzir LÍQUIDO OU ascítico

pleural LÍQUIDO, Ambos ou. Acima dos 50% de

Pacientes com pancreatite Aguda Severa desenvolvem

pseudocisto, Cuja Presença e supeitada

quando nao melhora clínica Semana HÁ UMA in

epidêmico o Ataque. Metade dos Pacientes com pseudocisto

elevações mostram nd lipase Serica.

Pancreatite crônica.

A lipase e also Serica

utilizada não Crônica Diagnóstico da pancreatite;

atuarem da destruição das Células acinares nsa Ult IMOS

Estágios da enfermidade diminuição in Resulta

nd nd quantidade da enzima Circulação.

Desordens agudas intra-abdominais.

 Como

Vezes o Diagnóstico da pancreatite e dificultado

OUTRAS Por Desordens intra-abdomi Achados Nais com

Clínicos Similares: úlceras gástricas duodenais UO

perfuradas, mesentérica Obstrução intestinal

Aguda e colecistite.

Enfermidade Crônica OU renal Aguda.

 Nestes

CASOS o aumento da Atividade lipásica Não É Tão

Frequente NEM Tão pronunciada Como Atividade um

da amilase.

Obstrução do Ducto pancreatico.

A Obstrução

do Ducto pancreatico Por carcinoma OU Cálculo

de pâncreas PoDE Elevar uma Atividade Serica da lipase,

dependendo da LOCALIZAÇÃO da Obstrução e um

quantidade de Tecido lesado.

Determinação DA LIPASE

Paciente.

Nao e exigido Cuidados Especiais.

Amostra.

 Soro isento de hemólise. Por e estável

Semana sem Refrigerador UMA OU Meses Vários Por um

-20 0C.

Interferentes. Resultados falsamente aumentados:

Codeina, heparina, morfina, cola, betanecol ngiopan-

creatografia endoscópica retrógrada.

Métodos. Essencial Pará Um Compreensão da METODOLOGIA

USADA NA Avaliação da lipase e o Fato

Desta enzima atuar nd interface éster-Água. Deste

modo, o parágrafo OS substratos serviços devem Ensaio

emulsões. A velocidade de Reação aumenta com uma

A Bioquímica Clínica: Princípios e Interpretações

emulsão da Dispersão. O Emprego de substratos

Onde uma interface éster-Água e inapropriada, de Permite

uma Ação de OUTRAS enzimas, Tais Como: Ester

hidrolases carboxílico, hidrolases aril-éster e lipase

lipoprotéica. Substratos Que triglicerí empregam -

dios de acidos graxos de Cadeia Curta, also

Reações permitem lipásicas Falsas.

Titulometria. Os Primeiros práticos MÉTODOS

um parágrafo da Medida empregavam lipase UMA emulsão

tamponada de azeite de oliva Como substrato. O

Soro um ser testado Por incubado era 24 o com h

substrato e acidos graxos ERAM OS titulados liberados

com hidróxido de Sódio a 0,05 M, Usando a

Como Indicador fenolftaleína.

Turbidimetria nefelometria ou. São MÉTODOS

simples e rapidos monitoram Que uma redução da

turvação de UMA emulsão de azeite de oliva Como

Resultado da Ação da lipase Sobre o substrato.

Enzimáticos. A lipase hidroliza o substrato

Produzindo triglicerídios contendo glicerol livre

Que e quantificado Por Diferentes Métodos.

Valores de Referência n º lipase um

Adultos 0,1 a 1,0 OU Ud Cherry-Crandall

28 a 280 U / L (acionais estagiário)

TRIPSINA

A tripsina uma enzima proteolítica e produzida não

pâncreas, nd forma precursora de tripsinogênio

inativo. O tripsinogênio e tripsina in convertido

Pela não enteroquinase duodeno. A ativação do

tripsinogênio não duodeno, in Lugar de pancreática intra-

Evita uma autodisgestão proteolítica do pâncreas.

A tripsina estabele PRESENTE NAS fezes de Crianças

Pequenas, com redução dos Teores Crianças in

Maiores e Adultos em, in Virtude da des truição da

Bactérias intestinais tripsina por. A Ausência de

tripsina NAS fezes e in encontrada Pacientes com

Insuficiência pancreática, fibrose cística (Avançada),

Má Absorção Crianças em, pancreatite e

(Crônica).

AMILASE

amilase e uma enzima da classe das hidrolases Que

catalisa o desdobramento do amido e glicogênio

Dieta ingeridos na. O amido e uma forma de

armazenamento Pará Um glicose nsa Vegetais, Sendo

Constituido Por UMA Mistura de amilose (amido nãoramificado)

e amilopectina (amido ramificado). A

Estrutura do glicogênio e da amilopectina semelhante ao,

com Maior numero de ramificações. A um-Amilase

catalisa uma das ligações hidrólise um-L, 4 da amilose,

amilopectina e glicogênio, liberando maltose e

isomaltose. Nao hidrolisa como ligações um-1,6.

A amilase secretada Serica e, fundamentalmente,

Pelas Glândulas salivares (forma S) Células e

acinares do pâncreas (forma P). secretada e

Não trato intestinal do Meio Por pancreatico Ducto.

Como salivares Glândulas secretam um Que amilase

inicia uma hidrólise do amido nsa Alimentos PRESENTE

NA boca e esôfago. This Ação e desativada Pelo

Conteúdo Ácido do Estômago. Não intestino, uma Ação

da amilase pancreática e favorecida Pelo Meio

PRESENTE ALCALINO não duodeno. A Atividade amilásica

e encontrada nenhuma also sêmem, testículos,

Ovários, a Tubos de Fallopio, Músculo Estriado, pulmões

e Tecido adiposo. A massa molecular dez amilase

Entre 40,000 e 50,000 Sendo daltons, facilmente,

Pelo filtrada glomérulo renal.

HIPERAMILASEMIA

Pancreatite Aguda.

Constitui hum distúrbio i nflamatório

Associado agudo do pâncreas de um edema,

intumescência e quantidades variadas de autodisgestão,

e necrose, CASOS alguns em, hemorragia.

Os níveis de amilasemia epidêmico aumentam 2 a 12 h do

Início do Episódio de dor abdominal e Que Constante,

Intenso e de LOCALIZAÇÃO COM epigástrica

Irradiação posterior par o dorso. A Atividade

amilásica retorna AO Terceiro o normal e o empreendedorismo

quarto dia. Os Valores maximos São Quatro uma SEIS

Maiores Vezes Que fazer OS Valores de Referência e

São atingidos Entre 12-72 h. A Elevação da magnitude

nao se correlaciona com uma severidade do

envolvimento pancreatico. Por Outro Lado, de 20% de

Todos OS CASOS de amilase apresentam pancreatite

normal (ex.: muitas pancreatite com Associadas

hiperlipemia). Outros testes laboratoriais, Como um

Medida da amilase urinaria, depuração da amilase,

Avaliação das Isoenzimas da amilase bis da Medida

Serica lipase, quando Conjunto in empregados

com um amilasemia da Avaliação, aumentam consideravelmente

uma especificidade da não Diagnóstico

pancreatite Aguda. Atuarem Menor de Utilidade não

Diagnóstico da pancreatite, a amilase urinaria estabele

aumentada Freqüentemente, atingindo Mais Valores

Que períodos elevados e persistem Maiores por.

Além da Determinação Outros Sinais da amilasemia

Frequentes São Utilizados par avaliar um atite pancreatite

Aguda:

§ No momento do diagnóstico: contagem de

leucócitos >16.000/mm3; glicemia >200

mg/dL; lactato desidrogenase >2 x normal;

ALT (GTP) > 6 x normal.

§ Durante as primeiras 48 horas: diminuição do

hematócrito >10%; cálcio sérico <8 mg/dL;

pO2 arterial <60 mm/Hg

Outras causas de hiperamilasemia pancreática:

§ Complicações da pancreatite aguda, tais

como: pseudocisto complicadas por

hemorragia, as cites e efusão pleural.

§ Lesões traumáticas do pâncreas, incluindo

trauma cirúrgico e investigações radiográficas.

§ Carcinoma de pâncreas, com obstrução dos

ductos pancreáticos.

§ Abscesso pancreático, onde a amilasemia aumenta

ocasionalmente.

Hiperamilasemia não-pancreática:

§ Insuficiência renal por declínio da depuração.

Os aumentos são proporcionais à extensão do

comprometimento renal.

A

94 Bioquímica Clínica: Princípios e Interpretações

§ Neoplasias de pulmão e ovário.

§ Síndrome de Meigs (associação de ascite, efusão

pleural e fibro ma de ovário).

§ Lesões das glândulas salivares, caxumba ou

cirurgia maxilofacial.

§ Macroamilasemia, encontradas em 1-2% da

população como resultado da combinação da

molécula de amilase com imunoglobulinas

(IgA e IgG) ou outras proteínas plasmáticas

normais o u anormais para formar um complexo

muito grande para ser filtrado pelo glomérulo;

neste evento não ocorre amilasúria aumentada

e não indica doença.

Hiperamilasemia por desordens de origem

complexa.

Com mecanismos desconhecidos ou

incertos:

§ Doença do trato biliar como a colecistite

aguda com aumentos de até quatro vezes os

valores de referência .

§ Eventos intra -abdominais (não pancreáticos)

tais como: úlcera péptica perfurada, obstrução

intestinal, infarto mesentérico, peritonite,

apendicite aguda, gravidez ectópica rompida,

aneurismas aórticos e oclusão mesentérica.

§ Trauma cerebral, a causa da elevação é

incerta, mas pode estar associada com trauma

das glâ ndulas salivares e/ou abdominais; isto é ,

dependente de outros órgãos atingidos.

§ Queimaduras e choques tra umáticos.

§ Hipermilasemia pós-operatória, ocorre em

20% dos pacientes submetidos a intervenções

cirúrgicas – incluindo procedimentos extra -abdominais.

§ Cetoacidose diabética,a hiperamilasemia está

presente em 80% destes pacientes sendo mais

freqüente quando os teores de glicemia são

>500 mg/dL (a fonte de amilase é incerta).

§ Transplante renal, um quinto dos transplantados

renais apresentam hiperamilasemia.

§ Alcoolismo agudo.

§ Pneumonia e enfermidades não-neoplásicas.

§ Drogas (opiatos, heroína) por constrição do

esfíncter de Oddi e ductos pancreáticos, com a

conseqüente elevação da pressão intraductal,

provocando regurgitação da amilase para o

soro.

AMILASE URINÁRIA

A hiperamilasúria reflete as elevações séricas da

amilase. A atividade da amilase urinária é determinada

em amostras de urina de uma hora (nestes

casos o paciente deve esvaziar completamente a

bexiga e desprezar esta urina; todas as urinas c olhidas

na hora seguinte são reservadas) ou de 24

horas. Na pancreatite aguda a reabsorção tubular

da amilase está reduzida, provavelmente secundária

a competição com outras proteínas de baixa

massa molecular. A hiperamilasúria ocorre também

em quase todas as situações que elevam a

amilase sérica.

DEPURAÇÃO DA AMILASE

A relação·entre a depuração renal da amilase e a

depuração da creatinina é útil no diagnóstico diferencial

da pancreatite aguda. Nesta patologia, a

depuração renal da amilase é, geralmente, maior

do que a depuração da creatinina causando elevação

na relação. O mecanismo responsável por este

aumento na depuração é, em parte, atribuído a um

distúrbio na reabsorção tubular da amilase (e de

outras proteínas de baixa massa molecular) na

pancreatite aguda. A fórmula empregada para a

depuração é:

100 %

Amilase no soro creat.na urina (mg/dL)

Amilase na urina (U/dL) creat.no soro (mg/dL)

´ =

´

´

As determinações de amilase e creatinina séricas

são realizadas em amostras obtidas ao mesmo

tempo da coleta de urina. A comparação das duas

depurações permite corrigir as alterações na velocidade

de filtração glomerular, condição esta também

encontrada na insuficiência renal severa.

Normalmente, os valores da relação variam

entre 1 a 4%, enquanto na pancreatite aguda, freqüentemente,

estão entre 7 e 15%. No entanto,

esta relação não é específica, pois apresenta elevações

na cetoacidose diabética, queimaduras

extensas, perfuração duodenal, mieloma, circulação

extracorpórea e grandes doses intravenosas de

corticoesteróides. A relação é normalizada após a

atividade da amilase no sangue e urina voltarem

aos valores de referência. O cálculo desta relação

permite diferenciar a macroamilasemia de outras

causas de hiperamilasemia. Em função do tamanho

do complexo de macroamilase sua depuração

renal é reduzida, fornecendo em valores abaixo de

1%.

DETERMINAÇÃO DA AMILASE

Paciente.

 Não é exigida preparação especial.

Amostra.

 Soro sem hemólise e não-lipêmico. A

atividade amilásica necessita de cálcio e cloretos

como cofatores. Assim, anticoagulantes quelantes

como o citrato, oxalato e EDTA são impróprios

para estas amo stras. Urina colhida no período de 1

h ou no período de 24 h sem conservantes. A

amilase é uma enzima bastante estável. No soro e

urina (livre de contaminação bacteriana) a amilase

é estável por uma semana em temperatura amb iente

ou por vários meses sob refrigeração.

Interferentes.

Resultados falsamente aumentados:

ácido aminossalicílico, ácido etacrínico,

grandes quantidades de etanol, aspirina, analgés icos

narcóticos, anticoncepcionais orais, colinérg icos,

contrastes radiográficos, corticoesteróides,

pancreozimina, furosemida, rifampina e tiazídicos.

Resultados falsamente reduzidos: glicose e fluoret

o s .

Métodos.

A amilase é determinada por diferentes

métodos. Os principais são: sacarogênicos, amiloclásticos,

cromolíticos e técnicas de monitoração

contínua.

Amiloclásticos (Iodométricos). A avaliação

amiloclástica (iodométrica) está baseada na capacidade

do iodo formar cor azul intensa com o

amido. Após a ação da amilase sobre um substrato

de amido em tempo determinado, a cor azul é

medida fornecendo a quantidade de polissacarídio

remanescente. O método de Van Loon modificado

por Caraway além de empregar um substrato rela -

tiv amente estável é eficiente e rápido.

Sacarogênicos. Nestes métodos, o substrato de

polissacarídio é hidrolizado pela ação da ami lase

com formação de monossacarídios e dissacarídios.

O dissacarídio (maltose) forma glicose pela ação

de uma maltase. A quantidade de glicose produzida

indica a atividade amilásica. As unidades

Somogyi obtidas neste método expressam o número

de mg de glicose liberada após incubação. A

quantidade de glicose já existente na amostra deve

ser considerada ao empregar estes métodos. É

bastante empregado em automação.

Ensaios cromolíticos. Utilizam um substrato

de amido ligado a um corante, formando um comple

xo insolúvel. Após a ação da amilase são produzidos

pequenos fragmentos de corante-substrato

solúveis em água medidos fotometricamente. Este

método é facilmente automatizado.

Monitoração contínua. Sistemas enzimáticosacoplados

são empregados para determinar a atividade

enzimática por técnica de monitoração

contínua na modificação na absorvância do NAD+

medida em 340 nm.

Outros métodos. Raramente empregados para

este propósito são os métodos turbidimétricos,

nefelométricos e de polarização fluorescente.

Valores de referência para a amilase

Soro de adultos 60 a 160 U/dL (Somogyi)

Urina

1500 a 1800 U/d (Somogyi)

ou 70-275 U/h

Líquido duodenal

50.000 a 80.000 Ud/L

(Somogyi)